この試験の目的は、スキネティックin vitro再生ヒト着色表皮モデルに、試験物質を6日間、毎日局所投与した後の美白効果を評価する事にある。
培養第11日目の5個の再生ヒト着色表皮組織（皮膚タイプVI型）に、試験物質を6日間投与する。処置後、全組織に、視覚的スコアーをつける。さらに、5個のうち１個の組織は、組織学（H&E染色）を評価し、他の１個の組織は細胞生存性評価に使用する。残りの3個の組織は、メラニンの定量に使用する。

1 µl の試験物質と1 µl のポジティブコントロール　(Melanex Duo; laboratoires Expansciences) を培養第11日目の5個の再生ヒト着色表皮組織の角質層表面（サイズ0.5 cm²）に毎日塗布する。処置は、最初の4日間（11日目から14日目まで）行なう。続いて、全組織（5個の未処置組織を含む）を37度、 5% CO2で培養する。処置終了時（第17日目）に分析（視覚的評価、組織学、MTT試験、メラニン抽出）を行なう。

注意：このプロトコールは、クリーム、ゲル状の製剤のために使用される。試験物質が液体の場合は、プロトコールを変更できる。試験物質を培養液の中に、体系的投与することによって試験する事も可能である。

各試験コンディションにつき、2個の組織を 300 µl の0.5 mg/ml MTT溶液に移し、37度、5% CO2で3 時間培養する。フォルマザン抽出は、1.5 ml のイソプロパノール溶液中で、 室温にて、最低2時間行なう。吸光度（OD)を570 nmで測定する。

結果は、ネガティブコントロールと比較した生存性の％として表わされる：
細胞生存性% = [OD　(570nm)　試験物質　/　OD　(570nm )　ネガティブコントロール)] x 100

各試験コンディションにつき、1個の組織を10％の緩衝フォルマリン溶液で固定し、パラフィンに包埋する。4ミクロンの垂直切片をヘマトキシリン/エオジン染色し、顕微鏡下で写真を撮る。

試験終了時、全組織（未処置、ポジティブコントロール、試験物質処置）は、美白の視覚的評価のために、デジタルカメラを使って写真を撮る。

試験終了時、3個の組織を、良く切れる解剖用メスでフィルターを切り取って、インサートから分離する。各フィルターは、360µlのSolvable　(Perkin Elmer)　に浸し、100度で、45分間、加熱する。吸光度は、レファランスとして、合成メラニンを使用して、80 µlの抽出液で、490 nmで測定する。結果は、ODとして、また、メラニン量mg/mlとして表わされる。

Chemical characterisation of hair melanins in various coat-color mutants of mice. Ozeki, H., Ito S., Wakamatsu K. and Hirobe T., Journal of Investigative Dermatology, 105, 3, 361-366, 1995).
 
Human pigmented epidermis reconstructed in chemically defined medium used for evaluation of modulation of pigmentation. F. Sahuc, B. De Wever & M. Rosdy. Presented at the 12th Meeting of the European Society of Pigmented Cell Research, Paris, Sept. 2004.