この試験　(ECVAM のための多施設試験－ファイザーPfizer / ノバルティスNovartis  / ジョンソン＆ジョンソンJohnson & Johnsonによってプレバリデーションされた) の目的は、3個のin vitroスキネティックHCE再生ヒト角膜上皮の表面に試験物質を塗布し、10分後に、細胞生存性を定量的に判定する事である。

角膜刺激性の予知モデル（判定基準）は、試験物質の分類を可能とする。

30 µl または、30 mg の試験物質を3個のin vitro再生ヒト角膜上皮の各表面　(サイズ0.5 cm²)　に塗布した後、室温で、10分間培養する。ネガティブコントロールとポジティブコントロール　(食塩水と1% SDS)　も、3個の組織上に塗布する。細胞生存性は、 MTT 試験を用いて、定量的に評価される。

各試験コンディションにつき、3個の組織を300 mlの0,5 mg/ml MTT溶液に移し、37度、 5% COで3 時間培養する。フォルマザン抽出は、1.5 ml のイソプロパノール溶液中で、室温に
て、最低2時間行なう。吸光度（OD)を570 nmで測定する。

結果は、ネガティブコントロールと比較した生存性の％として表わされる：
細胞生存性%=[OD (570nm) 試験物質/ OD (570nm ) ネガティブコントロール)] x 100

細胞生存性に基づく分類予知モデル（判定基準）：非刺激性　(生存性 ≥ 60%)、刺激性　(生存性< 60%)
試験物質は、試験物質によって得られた生存性がネガティブコントロールに比較して60％以下である場合は、刺激性として分類される。

Prevalidation of a new in vitro reconstituted human cornea model to assess the eye irritating potential of chemicals. Van Goethem F., Adriaens E., Alepee N., Straube F., De Wever B., Cappadoro M., Catoire S., Hansen E., Wolf A., and Vanparys P. Toxicol. In Vitro 2004. In press.
 
Three-dimensional construct of the human corneal epithelium for in vitro toxicology. D.H. Nguyen, R.W. Beuerman, B. De Wever and M. Rosdy. In: Alternative Toxicological Methods. Eds. Harry Salem and Sidney Katz, CRC Press, 147-159, 2003.