SkinEthic Labotories

試験の説明

経皮吸収試験


再生組織モデル

プロトコールの原理


この試験の目的は、再生ヒト表皮モデルに局所投与後の試験製品の透過性を判定する事にある。


試験手順の詳細

試験方法



培養第17日目の2個のin vitro再生ヒト表皮組織(サイズ0.5 cm²)に、局所的に試験製品を(試験スポンサーによって決定される濃度で)投与する。未処置コントロールも同時進行する。試験後の分析のために、1、2、3、6、24時間後に、組織下の培地を採集(そして、交換)する。試験終了時(24時間後)、組織の1個は、組織学(H&E染色)を評価し、他の1個を生存性評価に使用する。


細胞生存性の評価(MTT試験)


各試験コンディションにつき、1個の組織を300 µl の0.5 mg/ml MTT溶液に移し、37度、5% CO2で、3 時間培養する。フォルマザン抽出は、1.5 ml のイソプロパノール溶液中で、室温で、最低2時間行なう。吸光度(OD) を570 nmで測定する。
結果は、ネガティブコントロールと比較した生存性の%として表わされる:
細胞生存性% = [OD (570nm) 試験物質 / OD (570nm) ネガティブコントロール)] x 100


組織学


各試験コンディションにつき、1個の組織を10%緩衝フォルマリン溶液で固定し、パラフィンに包埋する。4ミクロンの垂直切片をヘマトキシリン/エオジンで染色し、顕微鏡下で写真を撮る。


参考文献


Characterization of the barrier function in a reconstructed human epidermis cultivated in chemically defined medium.
N. Garcia, O. Doucet, M. Bayer, D. Fouchard, L. Zastrow and JP. Marty. Intl. J. of  Cosmetic Sciences, 24, p.25-34, 2002.
 
Skin penetration and metabolism of topical glucocorticoids in reconstructed epidermis and excised human skin. Gysler A., Kleuser B., Sippl W., Lange K., Korting H. C., Höltje H.-D., and Schäfer-Korting M. Pharmaceutical. Research. Vol. 16, 9; p.1386-1391, 1999.