この試験の目的は、スキネティックin vitro再生ヒト表皮モデルに、試験物質を局所投与し、UVB照射後の防御効果を明らかにする事にある。4個のin vitro再生ヒト表皮組織に、試験物質を局所的に投与する。2個の組織は、続いて、300 mJ/cm²のUVB 照射を行い、他の2個の非照射のコントロール組織は暗所に保存する。照射直後、組織は、組織学(H&E染色)とピリミジン ダイマー検出の評価をする。
2µlの試験物質とポジティブコントロール (Minesol (Roc) SPF 60) を4個の再生ヒト表皮組織の角質層表面 (サイズ 0.5 cm²) に塗布する。未処置のネガティブコントロールも同時進行する。2個の組織は、300 mJ/cm² のUVB (Solar Simulator BIOSUN) で照射する。他の2個の非照射組織は、室温で暗所に保存する。組織は、照射後、直ちに、フォルマリン固定する。組織学(H&E染色)とピリミジンダイマーの検出を行なう。
各試験物質につき、3個の組織を10%緩衝フォルマリン溶液で固定し、パラフィンに包埋する。4ミクロン垂直切片をヘマトキシリン/エオジンで染色し、顕微鏡下で写真を撮る。免疫組織化学もピリミジンダイマー(H3抗体)の検出するために行なわれる。
Assessment of P53, P21 protein expression and cyclobutane pyrimidine dimer formation in a human skin culture model following UVB exposure. Robert C., Doucet O., Bonnet M., Bertino B., Zastrow L. ATLA special issue, p. 304, 1999.