この試験の目的は、試験物質をスキネティックin vitro 再生ヒト着色表皮モデルに、6日間、体系的に　(培養液中に) 　投与した後の黒化活性を評価することである。
培養第11日目の10個の再生ヒト着色表皮組織　(皮膚タイプ IV型)の培養液中に試験物質を6日間投与する。組織の半分　(5 個の組織)　は、UVA/UVB 照射する。処置後、全組織に視覚的スコアーをつける。さらに、5個の組織のうちの1個の組織は、組織学　(H&E 染色)　を評価し、他の1個の組織は、細胞生存性を評価に使用される。残りの3個の組織は、メラニンの定量に使用される。

培養第11日目の10個のin vitro 再生ヒト着色表皮組織　(サイズ0.5 cm²)　は、試験物質とポジティブコントロール (α-MSH) で6日間　(体系的投与)　処置する。組織の半分は、第12日目、第13日目、第14日目に50 mJ/cm² UVB / 1 J/cm² UVA照射をする。各処置後、全組織（5個の未処置組織を含む）は、37度、5% CO2で培養する。分析（視覚的評価、組織学、MTT試験、メラニン抽出）は、処置後6日目に行なう。

試験終了時に、1個の組織を 300 µl の0.5 mg/ml MTT溶液に移し、37度、5% CO2で3 時間培養する。フォルマザン抽出は、2 ml のイソプロパノール溶液中で、 室温で、最低2時間行なう。吸光度（OD)を570 nmで測定する。

結果は、ネガティブコントロールと比較した生存性の％として表わされる：
細胞生存性%=[OD　(570nm)　試験物質　/　 OD　(570nm )　ネガティブコントロール)] x 100

試験終了時、1個の組織を10％緩衝ホルリン溶液で固定し、パラフィンに包埋する。4ミクロンの垂直切片をヘマトキシリン/エオジン染色し、顕微鏡下で写真を撮る。

試験終了時、全組織（未処置、ポジティブコントロール、試験物質処置）は、黒化の視覚的評価のために、デジタルカメラを使って写真を撮る。

試験終了時、各コンディションにつき、3個の組織を、良く切れる解剖用メスでフィルターを切り取って、インサートから分離する。3つのフィルターは、360µlのSolvable (Perkin Elmer)　に浸し、100度で、45分間、加熱する。80 µlの抽出上澄み液の吸光度を、合成メラニンをリファランスとして使用し、490 nmで測定する。

Chemical characterisation of hair melanins in various coat-color mutants of mice. Ozeki, H., Ito S., Wakamatsu K. and Hirobe T., Journal of Investigative Dermatology, 105, 3, 361-366, 1995).
 
Human pigmented epidermis reconstructed in chemically defined medium used for evaluation of modulation of pigmentation. F. Sahuc, B. De Wever & M. Rosdy. Presented at the 12th Meeting of the European Society of Pigmented Cell Research, Paris, Sept. 2004.