試験の説明

試験の説明

皮膚腐食性試験(ECVAM バリデーションされた試験)

再生組織モデル

再生ヒト表皮

プロトコールの原理

皮膚腐食作用とは、試験物質の塗布に引き続き、皮膚に起る不可逆的な組織障害の事である。
この試験（ECVAMによってバリデーションされた試験）の目的は、スキネティックRHE in vitro再生ヒト表皮モデルに局所投与後の試験物質のin vitro腐食性ポテンシャルを判定することにある。

試験手順の詳細

試験方法

40 mlの各試験物質 (固形の場合は20 mg)と40 µl のポジティブコントロール (8N KOH) を6個の培養第17日目の再生ヒト表皮組織の角質層表面　(サイズ 0.5 cm²)　に塗布する。全組織　(6個の未処置組織を含む) は、37度、5% CO²で 3 分間、または、1時間　(各タイムポイント毎に3 個の組織)　培養する。処置期間終了時、組織をPBSで洗浄し、水分を吸い取り、細胞生存性を評価する (MTT 試験)。

細胞生存性の評価

組織を300 µl の1 mg/ml MTT溶液に移し、37度、5% CO²で3 時間培養する。
フォルマザン抽出は、1.5 ml のイソプロパノール溶液中で、室温にて、少なくとも2時間以上行なう。吸光度OD を570 nmで測定する。
結果は、ネガティブコントロールと比較した生存性の％として表示する：
細胞生存性%=[OD 　(570nm)　試験物質/ OD　 (570nm ) 　ネガティブコントロール)] x 100

予知モデル（判定基準）

以下の場合、試験物質は、皮膚に対して腐食性であると評価される：

3分間曝露後の細胞生存性が50％以下の場合、または、
3分間曝露後の細胞生存性が50％以上か、または　これと同等で、かつ、1時間曝露後の細胞生存性が15％以下である場合。

以下の場合、試験物質は、皮膚に対して非腐食性であると評価される：

3分間曝露後の細胞生存性が50％以上か、または　これと同等で、かつ、1時間曝露後の細胞生存性が15％以上か、または、これと同等である場合。

参考文献
	Assessment of the human epidermis model SkinEthicTM RHE for in vitro skin corrosion testing of chemicals according to new OECD TG 431. H. Kandárová, M. Liebsch, H. Spielmann, E. Genschow, E. Schmidt, D. Traue, R. Guest, A. Whittingham, N. Warren, A.O.Gamer, M. Remmele, T. Kaufmann, E. Wittmer, B. De Wever, M. Rosdy. Toxicology In Vitro, 20, 547-559, 2006.

SkinEthic Labotories